欢迎光临茏滢科技(上海)有限公司网站!
联系电话:+86-21-62118685
您的位置: 网站首页 > 技术文章 > 超滤离心管分离使用常见问题解答

超滤离心管分离使用常见问题解答

发布日期: 2021-07-22
浏览人气: 215
   1、蛋白截留不住?蛋白损失严重?该怎么选择选对截留分子量?
  您是否苦于超滤管流速慢呢?很有可能是截留分子量选小了。
  截留分子量是根据已知分子量(以道尔顿为单位)的溶质保持>90%的能力而给出的额定值。对于蛋白质,建议选择的截留分子量是需要截留的溶质分子质量的1/6-1/3。如果首先考虑流速的因素,则选择需要截留的溶质分子质量的1/3作为膜的截留分子量;如果截留效果作为主要考虑,则选择需要截留的溶质分子质量的1/6作为膜的截留分子量。另外,由于不同系列产品的工艺不一样,更换产品系列时,适合的截留分子量有时候是会变化的。
  2、浓缩后我发现浓缩液中没有目的蛋白,可能的原因是?
  首先,超滤管的起始蛋白浓度为01mg/ml.请确保您的样本的起始浓度大于这个浓度。其次,如果问题仍然出现。请不要丢弃您的样本滤过液,以做下一步分析:
  1)如果您的样本在滤过液中,那么请排查:
  a)您是否选择了合适截留分子量的超滤管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)?
  b)使用的离心力是否是在最高范围内?如果您使用的是rpm,请换算成相应的g离心
  c)离心机最近是否有校准过?
  d)您是否尝试这个蛋白?如果能确保您用同样的超滤管对其他蛋白成功操作的话,那么有可能是您的目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响浓缩效果,建议选用上一分子量级别的超滤管(如原本选用30K,此时可以选择10K)。
  2)如果您的样本也不在滤过液中:
  a)您的样本起始蛋白浓度是否大于0.1mg/ml?
  b)您用来确定样本浓度的方法是什么?是否可信?
  c)您的目的蛋白是不是沉淀了?如果是,具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀的方法。
分享到:
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站