超滤离心管分离使用常见问题解答

　　您是否苦于超滤管流速慢呢?很有可能是截留分子量选小了。

　　截留分子量是根据已知分子量（以道尔顿为单位）的溶质保持>90%的能力而给出的额定值。对于蛋白质，建议选择的截留分子量是需要截留的溶质分子质量的1/6-1/3。如果首先考虑流速的因素，则选择需要截留的溶质分子质量的1/3作为膜的截留分子量；如果截留效果作为主要考虑，则选择需要截留的溶质分子质量的1/6作为膜的截留分子量。另外，由于不同系列产品的工艺不一样，更换产品系列时，适合的截留分子量有时候是会变化的。

　　2、浓缩后我发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因是?

　　首先，超滤管的低起始蛋白浓度为01mg/ml.请确保您的样本的起始浓度大于这个浓度。其次，如果问题仍然出现。请不要丢弃您的样本滤过液，以做下一步分析：

　　1)如果您的样本在滤过液中，那么请排查：

　　a)您是否选择了合适截留分子量的超滤管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3）?

　　b)使用的离心力是否是在最高范围内?如果您使用的是rpm，请换算成相应的g离心

　　c)离心机最近是否有校准过?

　　d）您是否尝试这个蛋白?如果能确保您用同样的超滤管对其他蛋白成功操作的话，那么有可能是您的目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用上一分子量级别的超滤管(如原本选用30K，此时可以选择10K)。

　　2)如果您的样本也不在滤过液中：

　　a)您的样本起始蛋白浓度是否大于0.1mg/ml?

　　b)您用来确定样本浓度的方法是什么?是否可信?

　　c)您的目的蛋白是不是沉淀了?如果是，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀的方法。