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由于超滤离心管使用不恰当,导致蛋白损失很大如何处理呢?

发布日期: 2021-11-16
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  由于超滤离心管使用不恰当或是超滤知识缺乏引起的问题,简直成了实验汪们蛋白实验不成功、效率低下的最常见原因之一。比如说:
   为什么截留分子量选择没错,蛋白有时候却会漏出在滤出液中?
  导致漏蛋白甚至检测不到蛋白的原因很复杂,应优先根据样品调整工艺,因为同一种膜、截留分子量和装置组合对于不同的蛋白质类别甚至物种而言可能并非最优之选。
  超滤离心管在选择过程中,应首先执行以下步骤:
  1、考虑样品和分子特性:比如改变pH可能增加构象改变的风险,而降低温度可能降低浓缩效率等。
  2、选择正确的膜:超滤没有太多的膜选项,但您应对再生纤维素(RC)、Hydrosart®和聚醚砜(PES)材料进行测试,以确定哪种材料可为您的特定材料提供低的非特异性结合和最优的回收率。
  3、选择合适的截留分子量,通常是靶标1/3大小的截留分子量适合。但有时则需要更小的孔径来满足回收率的要求。如果在病毒和核酸样品,可参看下面截留分子量和病毒颗粒分子大小以及核酸大小的换算表。
  4、选择合适的装置:赛多利斯拥有适用于低浓度样品、DNA、蛋白质、病毒、过滤应用等广泛的装置选项;选择合适的装置可以有效改善结果。
  5、使用合适的装置处理方法:例如预冲洗以去除分析物或用非干扰蛋白冲洗以钝化结合位点并减少损失。
  6、考虑样品控制方法,例如使用装置内的“死体积”移走所有截留物,或预灌装滤液管以控制截留物的最终体积。
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